產品FAQ

qPCR常見問題解答

發佈時間:2019-05-15 11:24:02 點擊次數:

Q:Passive Reference Dye的作用是什麼,如何使用?

A:它們是針對不同機器型號校正加樣管間誤差的參比熒光染料。它們的濃度爲50×,使用時在20μl體系中加入0.4μl即可。

Q:CT值出現過晚?

A:可能是擴增效率低,反應條件不夠優化。此外PCR各種反應成分的降解或者PCR產物太長 (一般採用80-250 bp的產物長度) 也會造成CT值出現過晚。

Q:qPCR SuperMix是否需要調整Mg2+濃度?

A:一般不需要調整,當PCR結果不理想或通過其它調整不能獲得明顯改善時,可以考慮通過調整Mg2+濃度以改進擴增結果。

Q:擴增曲線異常?

A:

• 基線設置有誤。

• 高濃度的模板會導致CT值過早出現,即基線範圍變小,導致機器讀取熒光數值有誤。

Q:重複性差?

A:

• 操作誤差。

• 模板濃度過低會導致重複性變差,可適當提高模板濃度,降低稀釋倍數。

• 機器本身的孔間溫度不一致。

Q:NTC不爲零,如何優化?

A:

• 提高退火溫度。

• 降低引物工作濃度,如需要可降至60 nM。

• 儘量在冰上操作。

• 重新設計引物,必要時可設計多對引物,優中選優。



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